KPV-tripeptidi: tutkimusopas α-MSH:n C-terminaaliseen fragmenttiin anti-inflammatorisessa tutkimuksessa

⚠️ Vain tutkimuskäyttöön — Tässä artikkelissa KPV:tä käsitellään yksinomaan laboratoriotutkimuksen yhdisteenä. Se ei ole lääkesuositus, annosteluohje tai lääketieteellinen neuvo. KPV ei ole tarkoitettu ihmisen käytettäväksi. Sitä ei ole tarkoitettu minkään sairauden diagnosointiin, hoitoon, parantamiseen tai ehkäisyyn. Kaikki alla esitetyt väitteet viittaavat julkaistuun prekliiniseen tutkimukseen, in vitro -tutkimuksiin tai vertaisarvioituun kirjallisuuteen, joka on lainattu ainoastaan tieteellisen kontekstin vuoksi.

Johdanto

KPV on tripeptidi, joka koostuu lysiinistä, proliinista ja valiinista ja vastaa α-melanosyyttejä stimuloivan hormonin (α-MSH) tähteitä 11-13. Sen merkitys tutkimuksessa perustuu huomionarvoiseen havaintoon: koko α-MSH-tridekapeptidillä (Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val) on voimakas anti-inflammatorinen aktiivisuus, ja merkittävää kyllä, suuri osa tästä aktiivisuudesta säilyy pelkällä C-terminaalisella tripeptidillä KPV:llä — vaikka KPV:stä puuttuu His-Phe-Arg-Trp-ydinfarmakofori, jota tarvitaan klassisten melanokortiinireseptorien (MC1R, MC3R, MC4R, MC5R) sitomiseen [1][2][3].

Tämä anti-inflammatorisen aktiivisuuden erottuminen melanokortiinireseptoriin sitoutumisesta on tehnyt KPV:stä tieteellisesti kiinnostavan tutkimustyökalun. Se tarjoaa tavan tutkia α-MSH:n kaltaisia anti-inflammatorisia vaikutuksia ilman samanaikaista pigmenttiaktiivisuutta MC1R:ssä [1][2]. Tässä artikkelissa käydään läpi KPV:n rakenne, mekanismit ja tärkeimmät tutkimuskontekstit, joissa sitä on tutkittu: suolen epiteelin mallit, hengitysteiden epiteelin mallit, sarveiskalvon epiteelin mallit sekä kohdennetut nanopartikkelien annostelujärjestelmät.

Molekyylirakenne ja biokemia

KPV on yksinkertainen tripeptidi, jonka sekvenssi on H-Lys-Pro-Val-OH (tai H-Lys-Pro-Val-NH2 amidoidussa tutkimusmuodossa, joka vastaa α-MSH:n luontaista C-terminaalia). Sen molekyylikaava on C16H30N4O4 (vapaa happo) tai C16H31N5O3 (amidi), ja sen molekyylimassa on noin 342 Da (vapaa happo). Peptiditutkimusyhdisteeksi KPV on huomattavan pieni ja kemiallisesti yksinkertainen:

• Kolme tähdettä, yksi proliini: Keskeinen proliini asettaa konformaatiorajoitteen, joka erottaa KPV:n lineaarisista, joustavista tripeptideistä. Tämä rajoite on todennäköisesti tärkeä sen biologisen aktiivisuuden kannalta, ja sitä on hyödynnetty rakenne-aktiivisuustutkimuksessa.
• Emäksinen N-terminaali: Lysiinin ε-aminoryhmä tuottaa positiivisen varauksen fysiologisessa pH:ssa ja on pelkistävän alkyloinnin kohta Macnaughtanin laboratorion vuoden 2018 glykomimeettisessä modifikaatiotutkimuksessa [11].
• Hydrofobinen C-terminaali: C-terminaalissa oleva valiini lisää hydrofobisuutta ja osallistuu vuorovaikutukseen kohdeproteiinien tai soluunoton kuljettajaproteiinien kanssa.
• PepT1:n substraatti: KPV:n biokemiallisesti erottuva piirre on, että se on PepT1:n, suolen di-/tripeptidikuljettajan, substraatti, jonka ilmentyminen on lisääntynyt tulehtuneessa paksusuolikudoksessa tutkimusmalleissa. Merlinin laboratorio kuvasi yksityiskohtaisesti KPV:n soluunoton paksusuolen enterosyytteihin tämän kuljettajan välityksellä [4].
• CKPV2-dimeeri: Kahdesta KPV-sekvenssistä koostuva, Cys-Cys-sillalla yhdistetty disulfidisidoksinen dimeerimuoto ([CKPV]2) on kehitetty ja sitä on tutkittu tehokkaampana anti-endotoksiinivarianttina [12].

KPV:n yksinkertaisuudella on tutkimuksen kannalta sekä etuja että haittoja. Myönteisiä puolia ovat, että se on edullinen syntetisoida, kemiallisesti stabiili, vesiliukoinen ja soveltuu useisiin annostelumuotoihin. Kielteisiä puolia on, että sen lyhyys tekee siitä alttiin nopealle eliminaatiolle in vivo, ja sen vaikutusmekanismi reseptoritasolla on vähemmän suoraviivainen kuin täyspitkän α-MSH:n.

Vaikutusmekanismi tutkimusmalleissa

KPV:n vaikutusmekanismi on ollut aktiivinen tutkimuskysymys kahden vuosikymmenen ajan, ja julkaistu kirjallisuus kuvaa useita toisiaan poissulkemattomia reittejä.

1. NF-κB:n vaimentaminen. Julkaistun tutkimuskirjallisuuden johdonmukaisin mekanistinen havainto on, että KPV estää NF-κB-signalointia sekä suolen epiteelisoluissa että immuunisoluissa. Caco2-BBE-, HT29-Cl.19A- ja Jurkat-T-soluissa nanomolaariset KPV-pitoisuudet estivät NF-κB:n aktivaatiota, vähensivät pro-inflammatoristen sytokiinien ilmentymistä ja vaimensivat MAP-kinaasin signalointireittejä vasteena pro-inflammatorisiin ärsykkeisiin [4]. Ihmisen keuhkoputkien epiteelisoluissa (16HBE14o-) KPV esti TNF-α:n aikaansaamaa NF-κB:n aktivaatiota, I-κB-α:n stabiloitumista ja YFP-leimatun p65RelA:n tuma-translokaatiota, ja tulokset viittasivat vuorovaikutukseen p65RelA:n Imp-α3-sitoutumiskohdan kanssa, mikä estää sen kuljetuksen tumaan [8].

2. PepT1-välitteinen soluunotto. Merlinin laboratorion vuoden 2008 Gastroenterology-julkaisu osoitti, että KPV pääsee suolen epiteelisoluihin ja immuunisoluihin PepT1:n välityksellä; kyseessä on di-/tripeptidikuljettaja, joka ilmentyy konstitutiivisesti ohutsuolessa ja indusoituvasti tulehtuneessa paksusuolessa [4]. Tällä mekanismilla on tutkimuksen kannalta kaksi tärkeää seurausta: (a) se tarjoaa perustellun lähtökohdan KPV:n soluunoton tutkimiselle suolen tutkimusmalleissa, ja (b) se tuo mukaan kohdekudokseen rikastumisen mekanismin (PepT1:n ilmentymisen lisääntyminen tulehduskohdissa), joka on olennainen yhdisteen kudosjakauman kannalta tutkimusolosuhteissa.

3. MC1R:stä riippumaton aktiivisuus. KPV-tutkimuskirjallisuuden johdonmukainen havainto on, että sen anti-inflammatoriset vaikutukset eivät ehdottomasti edellytä MC1R:ää tai muita melanokortiinireseptoreita. DSS-mallin kokeissa, joissa käytettiin hiiriä, jotka ilmentävät toiminnaltaan puutteellista MC1R:ää (MC1Re/e), KPV:n anti-inflammatorinen aktiivisuus säilyi, mikä osoittaa, että ainakin osa sen aktiivisuudesta on MC1R:stä riippumatonta [3]. Muissa raporteissa on esitetty MC3R (erityisesti hengitysteiden epiteelin tutkimuksessa [8]) mahdollisena osatekijänä KPV:n kaltaisissa vaikutuksissa.

4. Typpioksidireitin muokkaus. Kanin sarveiskalvon epiteelin tutkimusmallissa KPV:n vaikutus uudelleenepitelisaatioon estyi typpioksidisyntaasin estäjällä L-NAME:lla, mikä osoittaa, että NO on tämän mallin alavirran välittäjä [6]. Tämä poikkeaa mekanistisesti NF-κB-keskeisestä reitistä, jota on kuvattu suolen ja hengitysteiden tutkimuksessa.

5. Antimikrobinen aktiivisuus. α-MSH:lla ja KPV:llä on suoria antimikrobisia vaikutuksia S. aureusta ja C. albicansia vastaan viljelmässä, riippumatta niiden immunomoduloivista vaikutuksista [10]. Tämä aktiivisuus voi vaikuttaa niiden vaikutuksiin tutkimusmalleissa, joissa infektio ja tulehdus esiintyvät yhdessä.

Keskeiset tutkimusalueet

1. Tulehduksellisen suolistosairauden tutkimus

Suolistotulehduksen mallit ovat alue, jolla KPV on parhaiten luonnehdittu, ja useat itsenäiset tutkimusryhmät ovat tuottaneet toistettavia havaintoja eri koliitin tutkimusmalleissa.

Kannengiesserin ja kollegoiden perustavanlaatuinen vuoden 2008 tutkimus raportoi KPV:n anti-inflammatorisia mittaustuloksia kahdessa hyvin kuvatussa hiiren koliitin tutkimusmallissa: dekstraaninatriumsulfaatti (DSS) ja CD45RBhi-T-solujen siirto [3]. DSS-mallissa KPV-altistus yhdistettiin vähentyneisiin tulehdussolujen infiltraatteihin ja alhaisempaan myeloperoksidaasin (MPO) aktiivisuuteen paksusuolikudoksessa. MC1R:n suhteen toimintakyvyttömillä hiirillä (MC1Re/e) anti-inflammatoriset mittaustulokset säilyivät, mikä vahvisti yhdisteen aktiivisuuden osittaisen MC1R:stä riippumattomuuden [3].

Merlinin laboratorio jatkoi tästä uraauurtavalla vuoden 2008 Gastroenterology-julkaisulla, jossa PepT1 tunnistettiin kuljettajaksi, joka vastaa KPV:n soluunotosta kolonosyyteissä ja immuunisoluissa [4]. Sama ryhmä kehitti sitten polymeerisiä nanopartikkelien annostelujärjestelmiä KPV:n kohdentamiseksi paksusuolikudokseen ja raportoi vuoden 2010 Gastroenterology-julkaisussa, että alginaattiin/kitosaaniin kapseloidut, KPV:llä ladatut nanopartikkelit olivat aktiivisia DSS-mallissa huomattavasti pienemmällä KPV-määrällä kuin vapaa KPV [5].

Tämä nanopartikkelien annosteluun keskittyvä tutkimuslinja on jatkunut: Molecular Therapy -lehden vuoden 2017 julkaisu kuvasi hyaluronihapolla funktionalisoituja, KPV:llä ladattuja nanopartikkeleita (HA-KPV-NPs, hiukkaskoko ~272 nm), jotka kohdistuivat paksusuolen epiteelisoluihin ja makrofageihin ja vähensivät TNF-α:n ilmentymistä koliitin tutkimusmalleissa suuremmalla kohteeseen sitoutumisella kuin tavanomaiset KPV-NP-formulaatiot [9]. Yhdessä nämä tutkimukset tekevät KPV:stä yhden parhaiten luonnehdituista peptidipohjaisista anti-inflammatorisista tutkimustyökaluista, ja sekä mekanistinen että annostelujärjestelmiin liittyvä työ tukee molekyyliin kohdistuvaa kiinnostusta.

2. Hengitysteiden tulehduksen tutkimus

Hengitysteiden tulehduksen tutkimus on toinen merkittävä KPV:n tutkimusalue. Landin ym. vuoden 2012 julkaisu International Journal of Physiology, Pathophysiology and Pharmacology -lehdessä luonnehti KPV:n ja γ-MSH:n vaikutuksia kuolemattomiksi tehdyissä ihmisen keuhkoputkien epiteelisoluissa (16HBE14o-), jotka altistettiin TNF-α:lle ja rinosynsytiaalivirukselle hengitysteiden tulehduksen tutkimusmalleina [8]. KPV aiheutti annoksesta riippuvaa NF-κB:n aktivaation, matriksin metalloproteinaasi-9:n aktiivisuuden, IL-8:n erityksen ja eotaksiinin erityksen estoa.

Mekanistisesti julkaisu osoitti, että KPV:n vaikutukset hengitysteiden epiteelissä liittyivät sen kuljetukseen tumaan, I-κB-α:n stabiloitumiseen ja p65RelA:n tuma-translokaation vaimenemiseen. Kilpailumääritykset viittasivat KPV:n ja p65RelA:n Imp-α3-sitoutumiskohdan väliseen vuorovaikutukseen, joka mahdollisesti estää importiini-α:n armadillo-domeenit 7 ja 8, jotka normaalisti tunnistavat NF-κB:n tumaan kohdistavan signaalin [8]. Sitä vastoin γ-MSH edellytti MC3R:ää anti-inflammatorisen vaikutuksensa saavuttamiseksi samassa tutkimusmallissa — mikä korostaa, että KPV ja siihen liittyvät melanokortiinijohdannaiset peptidit voivat vaikuttaa eri mekanismien kautta, vaikka niiden fenotyyppiset lopputulokset menevätkin päällekkäin.

Tähän työhön on viitattu allergisen hengitystien tutkimuskonteksteissa, joissa α-MSH:n ja sen johdannaisten vaikutuksia allergeenispesifisen IgE:n tuotantoon, eosinofiilien kertymiseen ja IL-4:n tuotantoon on tutkittu hiirimalleissa [7].

3. Sarveiskalvon epiteelin ja antimikrobinen tutkimus

Kolmas KPV:n tutkimusalue koskee sen vaikutuksia sarveiskalvon epiteeliin ja antimikrobista aktiivisuutta. Bonfiglion ym. vuoden 2006 julkaisu Experimental Eye Research -lehdessä tutki paikallisesti annosteltua KPV:tä kanin sarveiskalvon epiteelin tutkimusmallissa. Raportoitu vaikutus uudelleenepitelisaatioon estyi L-NAME:lla, mikä viittaa NO:hon alavirran välittäjänä [6].

Antimikrobisella puolella Cutulin ja kollegoiden vuoden 2000 tutkimus raportoi, että α-MSH ja KPV estivät S. aureuksen pesäkkeen muodostusta ja vähensivät C. albicansin elinkykyä ja itujuosteen muodostusta [10]. Nämä vaikutukset ilmenivät laajalla pitoisuusalueella, mukaan lukien fysiologinen pikomolaarinen alue, ja ne johtuivat ainakin osittain peptidien kyvystä lisätä solunsisäistä cAMP:ia. Huomionarvoista on, että KPV ei vähentänyt neutrofiilien kykyä tappaa patogeeneja vaan pikemminkin tehosti sitä; tämä fenotyyppi erottaa KPV:n klassisista anti-inflammatorisista aineista, jotka usein vaimentavat mikrobisidista toimintaa. Tämä anti-inflammatorisen, epiteeliin kohdistuvan ja antimikrobisen aktiivisuuden yhdistelmä on KPV:n erottuva piirre, joka on motivoinut tutkimusta malleissa, joissa infektio ja tulehdus esiintyvät yhdessä.

Gattin ym. vuoden 2006 tutkimus Journal of Surgical Research -lehdessä laajensi anti-endotoksiinitutkimuksen disulfidisidoksiseen dimeeriin (CKPV)2 ja osoitti, että tämä dimeerimuoto esti TNF-α:n tuotantoa LPS-stimuloiduissa ihmisen PBMC-soluissa, vähensi verenkierrossa olevaa TNF-α:ta LPS-injektion saaneilla rotilla ja palautti nettoultrasuodatuksen LPS:n aiheuttaman vatsakalvontulehduksen rottamallissa [12]. (CKPV)2 oli näissä määrityksissä tehokkaampi kuin KPV-monomeeri, mikä tarjoaa perustelun sen jatkotutkimukselle tutkimuskoettimena.

Stabiilisuus, säilytys ja käsittely laboratoriossa

KPV on pieni, kemiallisesti kestävä tripeptidi, jota on suoraviivaista käsitellä laboratoriossa:

• Lyofilisoitu muoto: Stabiili -20°C:ssa tai 2-8°C:ssa pitkäaikaista tutkimussäilytystä varten, kosteudelta suojattuna. KPV:n pieni koko ja labiilien sivuketjujen puuttuminen (ei Cys:iä, ei Met:iä, ei Trp:tä) tekevät siitä vähemmän altiin hapettavalle hajoamiselle kuin suuremmat peptidit, joilla on herkkiä tähteitä.
• Liuottaminen: Vesi, PBS tai laimea etikkahappo ovat tavanomaisia tutkimuskäytön liuotusaineita. KPV on hyvin vesiliukoinen eikä yleensä vaadi orgaanisia apuliuottimia.
• Stabiilisuus liuottamisen jälkeen: Vesipitoiset liuokset ovat stabiileja päivistä viikkoihin 2-8°C:ssa. Pidempiaikaista tutkimussäilytystä varten jaa annoksiin ja pakasta -20°C:ssa tai -80°C:ssa. Toistuvia jäädytys-sulatussyklejä tulee yleisenä periaatteena välttää, vaikka KPV kestää niitä paremmin kuin suuremmat peptidit.
• PepT1-imeytymisreitti: Koska PepT1 välittää KPV:n soluunoton, kuljettaja on keskeinen sille, miten peptidiä tutkitaan suolen tutkimusmalleissa [3][4]. Nanopartikkeleihin kapseloituja formulaatioita (alginaatti/kitosaani, hyaluronihappo) on luonnehdittu kohdennettua paksusuoleen annostelua varten tutkimusmalleissa [5][9].
• Analyyttinen laadunvarmistus: HPLC-puhtaus ≥95% ja tripeptidin massan massaspektrometrinen varmistus (~342 Da vapaa happo, ~341 Da amidi) ovat tavanomaisia tutkimuslaatuun kohdistuvia laadunvarmistusodotuksia. Puhtaus tulee varmistaa analyysitodistuksesta.
• Puhtausnäkökohdat: Koska KPV on niin lyhyt, synteesin sivutuotteet (deleetiosekvenssit, hapetustuotteet, rasemoituneet tähteet) voivat koeluoitua lähtöpeptidin kanssa. Tutkijoiden tulee tarkastella HPLC- ja MS-tietoja huolellisesti.

Tietyt annokset ja formulaatiot raportoidaan alkuperäisessä kirjallisuudessa ainoastaan bibliografisena kontekstina, ei ohjeena mihinkään käyttöön.

Tutkimusnäkökohdat ja rajoitukset

Reseptoribiologia on epätäydellisesti luonnehdittu. Toisin kuin sen lähtöyhdisteellä α-MSH:lla, KPV:llä ei ole selkeästi määriteltyä korkean affiniteetin melanokortiinireseptorivuorovaikutusta. Sen anti-inflammatoriset vaikutukset näyttävät sisältävän sekä reseptoririippuvaisia (MC3R, mahdollisesti muut) että reseptorista riippumattomia (NF-κB, NO, PepT1-soluunotto) mekanismeja [4][8]. Tutkijoiden tulee olla varovaisia olettaessaan yhtä ainoaa mekanismia uudessa koejärjestelmässä.

Laji- ja kudosspesifisyys. PepT1:n ilmentyminen, MC1R:n/MC3R:n jakauma ja NO-reitin aktiivisuus vaihtelevat kaikki lajien ja kudosten välillä. Jyrsijöiden IBD-tutkimuksesta muihin tulehdustutkimusmalleihin tehtävässä ekstrapoloinnissa tulee ottaa huomioon nämä erot.

Annos-vasteen epälineaarisuus. Useat julkaistut tutkimukset ovat raportoineet, että KPV on aktiivinen nanomolaarisella alueella in vitro mutta vaatii suurempia annoksia in vivo, mikä on yhdenmukaista pienen peptidin nopean eliminaation kanssa. Nanopartikkelien annostelutyötä motivoi osittain tämä farmakokineettinen rajoitus [5].

Metabolinen stabiilisuus. Vapaa KPV plasmassa on altis nopealle peptidaasin aiheuttamalle hajoamiselle. Songokin ym. vuoden 2018 glykomimeettinen modifikaatiotutkimus tarkasteli lysiinitähteen pelkistävää glykoalkylointia entsymaattisen stabiilisuuden parantamiseksi, ja analogit osoittivat proteolyyttistä kestävyyttä säilyttäen samalla osan biologisesta aktiivisuudesta [11]. Tämä on hyödyllinen tutkimuslähtökohta tutkijoille, jotka ovat kiinnostuneita KPV:n in vivo -puoliintumisajan pidentämisestä.

Translationaaliset varaukset. Suurin osa julkaistusta KPV-tutkimuksesta on tehty prekliinisissä soluviljelmä- ja jyrsijämalleissa. Ihmisillä tehty interventiotutkimus on rajallista, ja tutkijoiden tulee noudattaa tavanomaista varovaisuutta tulkitessaan translationaalisia väitteitä.

Usein kysytyt tutkimuskysymykset

K1: Mikä on KPV:n ja α-MSH:n välinen suhde?
KPV vastaa α-MSH:n tähteitä 11-13 (C-terminaalinen tripeptidi); α-MSH on itsessään 13 tähteen peptidi, joka syntyy proopiomelanokortiinista (POMC) translaationjälkeisen prosessoinnin kautta. Täyspitkä α-MSH sitoutuu melanokortiinireseptoreihin (MC1R-MC5R) keskeisen His-Phe-Arg-Trp-ytimen välityksellä, kun taas KPV:stä puuttuu tämä ydin ja se säilyttää anti-inflammatorisen aktiivisuuden pääosin reseptorista riippumattomien mekanismien kautta [1][2][3]. Tutkimusolosuhteissa KPV tarjoaa tavan erottaa α-MSH:n kaltaiset anti-inflammatoriset vaikutukset MC1R:n ja muiden klassisten melanokortiinireseptorien välittämistä pigmentti- ja hormonaalisista vaikutuksista.

K2: Miten KPV pääsee soluihin?
Suolen epiteelisoluissa ja immuunisoluissa KPV otetaan soluun PepT1:n välityksellä; kyseessä on protonivälitteinen di-/tripeptidikuljettaja, jonka ilmentyminen on lisääntynyt tulehtuneessa paksusuolikudoksessa [4]. Hengitysteiden epiteelissä KPV:n on raportoitu kulkeutuvan tumaan importiini-α-koneiston välityksellä, mikä mahdollisesti ohittaa tietyn pintareseptorin tarpeen [8]. Näiden reittien suhteellinen osuus vaihtelee kudoksen ja koeasetelman mukaan.

K3: Onko KPV oraalisesti biologisesti hyödynnettävissä?
Prekliinisissä suolen tutkimusmalleissa KPV on osoittanut anti-inflammatorisia mittaustuloksia, jotka ovat yhdenmukaisia PepT1-välitteisen soluunoton kanssa [3][4]. PepT1-kuljettaja tarjoaa mekanistisen perustan KPV:n imeytymiselle suolen epiteelin läpi ja on tärkein syy siihen, miksi yhdiste on kiinnostava ruoansulatuskanavan tutkimuksessa.

K4: Mikä on (CKPV)2 ja miten se liittyy KPV:hen?
(CKPV)2 on disulfidisidoksinen dimeeri, joka koostuu kahdesta Cys-Cys-sillalla yhdistetystä KPV-sekvenssistä. Sen on raportoitu olevan tehokkaampi kuin KPV-monomeeri anti-endotoksiinitutkimusmäärityksissä, mukaan lukien LPS-stimuloitu TNF-α:n tuotanto ihmisen PBMC-soluissa ja LPS:n aiheuttama vatsakalvontulehdus rotilla [12]. Dimeerimuoto on hyödyllinen tutkimusvariantti tutkimuksissa, jotka vaativat suurempaa tehoa.

K5: Mitkä ovat parhaat in vitro -tutkimusmallit KPV:n anti-inflammatoriseen tutkimukseen?
Suolistotutkimukseen Caco-2 (tai Caco2-BBE), HT29-Cl.19A ja RAW 264.7 -makrofagit ovat vakiintuneita järjestelmiä [4]. Hengitysteiden tutkimukseen on luonnehdittu 16HBE14o- ihmisen keuhkoputkien epiteelisoluja [8]. Jurkat-T-soluja on käytetty lymfosyytteihin keskittyvään tutkimukseen [4]. Pro-inflammatoriset ärsykkeet sisältävät tyypillisesti TNF-α:n, IL-1β:n, LPS:n tai IFN-γ:n, ja mittaustuloksiin kuuluvat NF-κB-reportterimääritykset, sytokiini-ELISA-määritykset (IL-8, IL-6, TNF-α) ja MAP-kinaasin fosforylaatio Western blot -menetelmällä.

Lähteet

PubMedin mukaan seuraavia vertaisarvioituja artikkeleita käytettiin tämän tutkimuskatsauksen ensisijaisina lähteinä. DOI-linkit on annettu, kun ne ovat saatavilla.

1. Luger TA, Brzoska T. alpha-MSH related peptides: a new class of anti-inflammatory and immunomodulating drugs. Ann Rheum Dis. 2007;66 Suppl 3:iii52-5. PMID: 17934097. DOI
2. Brzoska T, Böhm M, Lügering A, Loser K, Luger TA. Terminal signal: anti-inflammatory effects of α-melanocyte-stimulating hormone related peptides beyond the pharmacophore. Adv Exp Med Biol. 2010;681:107-16. PMID: 21222263. DOI
3. Kannengiesser K, Maaser C, Heidemann J, et al. Melanocortin-derived tripeptide KPV has anti-inflammatory potential in murine models of inflammatory bowel disease. Inflamm Bowel Dis. 2008;14(3):324-31. PMID: 18092346. DOI
4. Dalmasso G, Charrier-Hisamuddin L, Nguyen HT, Yan Y, Sitaraman S, Merlin D. PepT1-mediated tripeptide KPV uptake reduces intestinal inflammation. Gastroenterology. 2008;134(1):166-78. PMID: 18061177. DOI
5. Laroui H, Dalmasso G, Nguyen HT, Yan Y, Sitaraman SV, Merlin D. Drug-loaded nanoparticles targeted to the colon with polysaccharide hydrogel reduce colitis in a mouse model. Gastroenterology. 2010;138(3):843-53.e1-2. PMID: 19909746. DOI
6. Bonfiglio V, Camillieri G, Avitabile T, Leggio GM, Drago F. Effects of the COOH-terminal tripeptide alpha-MSH(11-13) on corneal epithelial wound healing: role of nitric oxide. Exp Eye Res. 2006;83(6):1366-72. PMID: 16965771. DOI
7. Luger TA, Scholzen TE, Brzoska T, Böhm M. New insights into the functions of alpha-MSH and related peptides in the immune system. Ann N Y Acad Sci. 2003;994:133-40. PMID: 12851308. DOI
8. Land SC. Inhibition of cellular and systemic inflammation cues in human bronchial epithelial cells by melanocortin-related peptides: mechanism of KPV action and a role for MC3R agonists. Int J Physiol Pathophysiol Pharmacol. 2012;4(2):59-73. PMID: 22837805.
9. Xiao B, Xu Z, Viennois E, et al. Orally Targeted Delivery of Tripeptide KPV via Hyaluronic Acid-Functionalized Nanoparticles Efficiently Alleviates Ulcerative Colitis. Mol Ther. 2017;25(7):1628-1640. PMID: 28143741. DOI
10. Cutuli M, Cristiani S, Lipton JM, Catania A. Antimicrobial effects of alpha-MSH peptides. J Leukoc Biol. 2000;67(2):233-9. PMID: 10670585. DOI
11. Songok AC, Panta P, Doerrler WT, Macnaughtan MA, Taylor CM. Structural modification of the tripeptide KPV by reductive “glycoalkylation” of the lysine residue. PLoS One. 2018;13(6):e0199686. PMID: 29953505. DOI
12. Gatti S, Carlin A, Sordi A, et al. Inhibitory effects of the peptide (CKPV)2 on endotoxin-induced host reactions. J Surg Res. 2006;131(2):209-14. PMID: 16413580. DOI

---

Vastuuvapauslauseke: Kaikki CertaPeptidesin myymät tuotteet on tarkoitettu ainoastaan laboratoriotutkimuskäyttöön. Ei ihmisten eikä eläinlääkinnälliseen käyttöön. Ei nautittavaksi. Tämä artikkeli tarjotaan tieteellisiin ja opetuksellisiin tarkoituksiin, eikä se ole lääketieteellistä neuvontaa, annosteluohjeistusta tai minkään tietyn käytön suositus. Tutkijat ovat vastuussa kaikkien sovellettavien institutionaalisten, kansallisten ja kansainvälisten säädösten noudattamisesta, jotka koskevat peptiditutkimusyhdisteiden hankintaa, käsittelyä ja tutkimusta.